Quy trình đếm tế bào T-CD4 trên máy CYFLOW SL3

Hệ thống máy Cyflow Partec dùng trong xét nghiệm đếm tế bào lympho T- CD4 bao gồm hai dòng máy là Cyflow Couter và Cyflow SL 3. Cả hai dòng máy đều có 1 đèn laser, có khả năng khảo sát 3 chỉ tiêu bao gồm SSC và hai màu huỳnh quang, có thể cung cấp các kết quả về cả phần trăm hoặc số lượng tuyệt đối tế bào lympho T-CD4 tùy vào bộ sinh phẩm sử dụng (CD4-PE hoặc CD45 PE Dy647/CD4 PE). Hệ thống máy Cyflow xác định số lượng tuyệt đối của quần thể tế bào phân tích dựa trên việc đo lường thể tích thực (200ul) giữa hai đầu điện cực khi hút mẫu. Đây là hệ thống đóng, có thiết kế đơn giản, gọn nhẹ và giá thành xét nghiệm tương đối thấp. Sau thời gian xử lý mẫu khoảng 30 phút, máy có công suất 15-20 mẫu/giờ.

1.     Dụng cụ, hoá chất, bệnh phẩm

1.1.         Dụng cụ và thiết bị

- Máy đếm tế bào CD4 Cyflow SL3.

- Phòng làm việc kín, không có bụi, nhiệt độ 18 – 250C.

- Các thiết bị phụ trợ gồm:

+ Tủ lạnh để bảo quản hóa chất.

+ Hộp kín để ủ mẫu.

+ Ống chạy mẫu chuyên dụng 3,5ml

+ Pipette (10µl, 20µl, 1000µl).

+ Đầu côn.

+ Đồng hồ bấm giây.

1.2. Hóa chất và sinh phẩm

- Kit CD4 mAB-PE, CD45 mAB PE-Dy 467.

- Nước cất 2 lần***.

- Hóa chất pha dung dịch nước Sheath gồm 2 lọ: Twin và sodium azide

-  Mẫu chuẩn máy (Countcheck beads green).

- Dung dịch rửa máy(CLEANING SOLUTION – màu xanh).

- Dung dịch khử trùng(DECONTAMINATION SOLUTION-màu tím).

1.3. Bệnh phẩm

Theo hướng dẫn về quy định lấy mẫu bệnh phẩm.

2.     Kỹ thuật tiến hành

2.1. Vận hành máy

                      Bước 1: Kiểm tra hệ thống trước khi chạy

Đảm bảo các cáp nối, dây điện đã nối đúng; bình chứa dung dịch tạo dòng (sheath fluid) đầy ở mức 800ml (Cách pha dụng dịch tạo dòng: đổ đầy nước cất 2 lần vào bình chứa tam giác bổ  sung thêm vào bình chứa 1 lọ twin và 1 lọ sodium azide lắc đều và phải chuẩn bị trước 24h, hạn sử dụng là 1 tháng); bình chứa nước thải cạn (cho 25ml   hypochloride vào vào bình thải); các nắp chai được đóng chặt; các ống dẫn không có bọt (ống dẫn dung dịch tạo dòng).

- Bật máy CyFlow SL3 bằng công tắc phía sau lưng máy.

- Bật máy in.

- Bật máy tính sau 5-10p.

- Khởi động chương trình FloMax bằng cách kích đúp vào biểu tượng

FloMax trên màn hình. Chọn chính xác nút Ok để mở màn hình làm việc.

            Bước 2: Rửa máy trước khi thực hiện chạy

- Lấy 1,6ml dung dịch rửa máy (CLEANING SOLUTION – màu xanh) vào ống nghiệm, cắm ống vào cổng lấy hút mẫu, làm dứt khoát cho đến khi nghe tiếng click phát ra. Máy sẽ tự động chạy để rửa. Để máy chạy hết 1,6ml dung dịch. Sử dụng tốc độ 4 để rửa máy.

- Tiến hành rửa lại bằng dung dịch nước Sheath như sau: Trên thanh công cụ kích vào Acquisition/sheath fluid prime, dung dịch Sheath sẽ được tự động bơm ngược từ bình đựng nước sheath ra ống mẫu. Theo dõi mức nước chảy vào ống mẫu, bấm OK để kết thúc. Tiến hành rửa bằng dung dịch sheath ít nhất là

1,6ml.

Bước 3: Kiểm tra máy bằng mẫu chuẩn máy-count check beads green

- Chuẩn bị hoá chất chuẩn:

+ Lấy hoá chất chuẩn được bảo quản trong tủ lạnh 2- 8 0C, đưa về nhiệt độ

phòng 20-250C trong 15-20p.

+ Trộn đều bằng tay, không vortex để tránh vỡ các hạt chuẩn.

+ Sử dụng pipet hút 850µl dung dịch hoá chất chuẩn vào ống đựng mẫu.

- Tạo form đồ thị và thông số chuẩn:

+ Lấy biểu đồ chuẩn: Vào mục File/ Open/ System C/ Flomax/ count check chuẩn. Mở file count check chuẩn bằng động tác kích đúp => Thu được biểu đồ chuẩn cho chạy hoá chất chuẩn máy.

+ Lấy thông số chuẩn: Kích vào nút Load ở góc trái phía dưới màn hình và theo đường dẫn sau: File/ Open/ System C/ Flomax/ Count check chuẩn. ist. Kích đúp để mở file và chọn open = > Thu được thông số chuẩn cho chạy count check beads green.

- Chạy count check:

+ Lắc đều ống mẫu, sau đó cắm ống vào cổng hút mẫu cho đến khi nghe có tiếng “tách” phát ra.

+ Để cho máy tự động chạy, khi đó đèn RUN trên thân máy CyFlow SL3

sẽ sáng.

+ Khi máy chuyển sang chế độ đếm, đèn COUNT sáng thì không được tác động gì vào máy.

- Phân tích kết quả:

+ Tạo cổng gating để thu kết quả theo đường dẫn sau: trên màn hình hiển thị vào mục Analysis/ Gating, chọn Delete hoặc clear all để xoá cổng cũ. Lấy cổng mới bằng cách chọn range/ nhấn nút new để tạo cổng.

+ So sánh kết qủa của vùng tạo cổng với số đếm trên thân lọ count check beads green với dung sai cho phép là +/- 10%. Nếu kết quả nằm trong giới hạn cho phép,và phù hợp với biểu đồ Levey-jenning khi đó chúng ta tiến hành xử lý

Hình dạng tiêu chuẩn của đồ thị đếm CountCheck

Chú ý: Tiến hành rửa máy theo qui trình đã được đề cập ở trên trước khi chuyển sang ứng dụng mới như CD4, CD3, CD8 hoặc CD4%.

2.2. Phân tích tuyệt đối

* Chuẩn bị mẫu

- Trộn đều ống máu

- Lấy 20µl máu toàn phần cho vào ống đựng mẫu chuyên dụng. (tráng đầu côn 1-2 lần trước khi hút mẫu và có thể sử dụng pipet ngược để hạn chế mất tế bào).

- Bổ sung 20µl dung dịch sinh phẩm CD4 mAB-PE vào, trộn đều (bằng cách lắc ống nghiệm, không sử dụng máy vortex) sau đó ủ trong bóng tối 15 phút ở nhiệt độ phòng.

- Bổ sung 800µl dung dịch đệm Buffer 1, trộn đều ( không trộn bằng máy vortex sợ làm đứt liên kết kháng thể gắn trên tế bào). Mẫu máu đã sẵn sàng để được phân tích.

Mẫu máu sau khi nhuộm và bổ sung dung dịch đệm (buffer) có thể phân tích trong vòng 6 giờ trong điều kiện nhiệt độ phòng hoặc 48h nếu được bảo quản ở nhiệt độ 2- 8 ⁰C

*      Thiết lập máy cho chạy mẫu CD4 tuyệt đối

- Thiết lập biểu đồ chuẩn theo đường dẫn sau: Vào mục File/open/ system

C/ Flomax/ CD4 chuẩn. Kích đúp và chọn open ta thu được biểu đồ chuẩn.

- Thiết lập thông số chuẩn: Trên panel góc trái của màn hình chọn Load và theo đường dẫn sau: File / Open/ System C/ Flomax/ CD4 chuẩn.ist. Kích đúp ta thu được thông số chuẩn.

* Đếm tế bào CD4 tuyệt đối

Lắc đều ống mẫu trước khi phân tích, đưa ống nghiệm vào cổng hút mẫu, để máy tự động làm việc, .Khi máy chuyển sang chế độ COUNT thì không tác động gì thêm để máy chạy đến khi kết thúc. Chờ máy tự động rửa xong, tháo ống nghiệm, tiến hành lưu file dữ liệu và tiến hành phân tích.

* Phân tích kết quả

-      Khoanh vùng quần thể tế bào:

  + Vào mục Analysis => Gating để lấy mục gating

+ Chọn loại Range

              + Nhấn nút New để tạo cổng.

             + Đưa chuột đến biểu đồ FL2 (phía dưới bên phải màn hình) đặt giới hạn dưới phía bên trái của đỉnh đồ thị và đặt giới hạn trên phía bên phải đỉnh đồ thị, có thể chỉnh để phần đồ thị nằm trong vùng gating.

- Tạo báo cáo:

+ Vào mục Panel => Creat report: cửa sổ nhỏ xuất hiện, nhấn nút Select để chọn template báo cáo cho CD4 theo đường dấn sau: System C/ Flomax/ Report/ sample/ HIV monitoring/ CD4 template (dạng file word).doc. Sau đó nhấn nút Creat.

+ Báo cáo sẽ tự động được xuất ra dạng file Word (.doc)

Chú ý: Tắt các đường dẫn của các dữ liệu thô khác nhau khi tạo report.

Các bước tạo báo cáo với file dữ liệu đang được mở

- In kết quả: Trên màn hình chương trình Microsoft Word, nhấn biểu tượng máy in hoặc vào mục File => print để in báo cáo.

*      Khử trùng máy sau khi thực hiện xét nghiệm

- Lấy 1,6ml dung dịch khử trùng (DECONTAMINATION SOLUTION) màu tím vào ống nghiệm rồi cắm vào cổng hút mẫu. Để máy chạy khoảng 5 giây thì nhấn nút STOP để dừng máy trong vòng 10 phút (vẫn để nguyên ống dung dịch gắn vào cổng hút mẫu), sau đó nhấn nút START để máy chạy tự động cho đến khi kết thúc. Chạy máy với dung dịch nước SHEATH trong 2 phút rồi nhấn STOP- bước rửa này là bắt buộc để tránh đóng cặn trong cuvet.

- Thoát khỏi chương trình FloMax, tắt máy tính, máy in và cuối cùng tắt

máy CyFlow SL3.

2.3. Phân tích CD4%

* Chuẩn bị mẫu

- Lấy 20µl máu toàn phần cho vào ống nghiệm.

- Bổ sung 10µl dung dịch sinh phẩm CD4 mAB-PE và 10µl sinh phẩm

CD45 mAB PE-Dy 467, trộn đều sau đó ủ trong tối 15 phút.

- Bổ sung 400µl dung dịch đệm Buffer 1. Ngay trước khi phân tích, bổ sung thêm 400µl dung dịch đệm buffer 2 (bằng cách lắc ống nghiệm, không sử dụng máy vortex), trộn đều. Mẫu máu đã sẵn sàng để được phân tích.

(Mẫu máu sau khi bổ sung buffer 1 có thể sử dụng trong vòng 2 ngày trong điều kiện nhiệt độ 2-8⁰C).

* Thiết lập máy

- Thiết lập biểu đồ chuẩn theo đường dẫn sau: Vào mục File/open/ system C/ Flomax/ CD4% chuẩn. Kích đúp và chọn open ta thu được biểu đồ chuẩn.

- Thiết lập thông số chuẩn: Trên panel góc trái của màn hình chọn Load và theo đường dẫn sau: File / Open/ System C/ Flomax/ CD4% chuẩn. Kích đúp ta thu được thông số chuẩn.

* Phân tích CD4%

- Lắc đều ống mẫu trước khi phân tích, đưa ống nghiệm vào cổng hút mẫu, để máy tự động làm việc, có thể nhấn nút CLEAR để làm mới màn hình khi đỉnh biểu đồ lên cao.

- Khi máy chuyển sang chế độ COUNT thì không tác động gì thêm để máy chạy đến khi kết thúc. Chờ máy tự động rửa xong, tháo ống nhiệm, tiến hành lưu file dữ liệu và tiến hành phân tích

* Phân tích kết quả

- Chọn GATE:

+ Vào mục Analysis => Gating để lấy mục gating.

+ Chọn loại Polygon.

+ Nhấn nút New để tạo cổng.

             + Đưa chuột đến biểu đồ FL2 SSC (phía dưới bên trái màn hình) chọn và đặt giới hạn trên phía bên phải đỉnh đùng R1 trên biểu đồ (vùng tế bào CD4), rê chuột sang biểu đồ FL2 SSC để chọn vùng R2 (vùng tế bào CD4 và CD45).

Biểu đồ kết quả đếm tế bào CD4%

- Tạo báo cáo:

+ Vào mục Panel => Create report: cửa sổ nhỏ xuất hiện, nhấn nút Select để chọn template báo cáo cho CD4% theo đường dấn sau: System C/ Flomax/ Report/ sample/ HIV monitoring/ CD4% template (dạng file word).doc. Sau đó nhấn nút Create.

+ Báo cáo sẽ tự động được xuất ra dạng file Word (.doc) Chú ý: tắt các bản kết quả khác khi tạo report

- In kết quả: Trên màn hình chương trình Microsoft Word, nhấn biểu tượng máy in hoặc vào mục File => print để in báo cáo.

* Khử trùng máy

- Lấy 1,6ml dung dịch khử trùng (DECONTAMINATION SOLUTION)

màu tím vào ống nghiệm rồi cắm vào cổng hút mẫu.

- Để máy chạy khoảng 5 giây thì nhấn nút STOP để dừng máy trong vòng

10 phút (vẫn để nguyên ống dung dịch gắn vào cổng hút mẫu), sau đó nhấn nút

START để máy chạy tự động cho đến khi kết thúc.

- Chạy máy với dung dịch nước SHEATH trong 2 phút rồi nhấn STOP-

bước rửa này là bắt buộc để tránh đóng cặn trong cuvet.

3. Một số lỗi thường gặp trên máy CYFLOW SL3 và cách xử lý

Người sử dụng cần nắm chắc nguyên lý hoạt động của máy để có thể xác định nguyên nhân của sự cố một cách nhanh chóng và chính xác.

Khi có sự cố thì cần tiến hành xác định sự cố và xử lý theo nguyên tắc từ đơn giản đến phức tạp

TT	Hiện tượng	Nguyên nhân	Xử lý
1	Bật máy không thấy đèn phía trước sáng	Chưa vào điện do dây dẫn bị tuột.	Kiểm tra dây dẫn và cắm lại cho chắc.
		Bộ đổi điện bị hỏng	Yêu  cầu  thay  bộ  đổi  điện mới
		Bộ phận điện tử trong máy bị hỏng	Yêu cầu hãng cung cấp sửa chữa
2	Khởi động phần mềm FloMax,   khi   biểu   đồ hiện ra thì thấy có báo trên  trục  đồ  thị  ở  các biểu  đồ  là  “No Selection”	Do khi khởi động phần mềm đã bấm nhầm nút Cancel trên cửa sổ nhỏ hiện  ra  sau  khi  bấm vào biểu tượng FloMax thay  vì  phải  bấm  nút OK	Nạp lại các thông số tương ứng cần sử dụng. Thoát khỏi phần mềm rồi vào lại phần mềm.
3	Bật phần mềm thấy máy báo  bình waste đã  đầy trong khi mức dung dịch trong bình chưa chạm đến  điện  cực  đo  mức dung dịch.	Do hơi ẩm đã bám vào nắp  bình, gây ra  hiện tượng nối cực giữa hai điện cực báo mức dung dịch.	Mở nắp bình chứa nước thải, dùng giấy thấm khô lau sạch các  gốc  điện  cực  và  phần nắp xung quanh, có thể dùng mày sấy để làm khô
4	Khi cắm ống mẫu vào cổng hút mẫu, thấy dung dịch trong ống bị dâng lên	Cắm ống mẫu chưa đúng, có hở khí giữa cổng  hút  mẫu  và  ống nghiệm chứa mẫu	Thay mẫu khác, chú ý luyện tay  để  thao  tác  chính  xác hơn.
		Ồng nghiệm bị vỡ. nứt gây ra hở khí	Kiểm tra và  thay ống  mẫu khác không bị vỡ
		Doăng   kín   khí   bên trong cổng hút mẫu bị rách, xước do sử dụng quá lâu chưa thay	Thay doăng mới

TT	Hiện tượng	Nguyên nhân	Xử lý
		Đường ống dẫn từ bơm mẫu đến cổng hút mẫu bị hỏng làm dung dịch sheath có  áp suất cao hơn đi vào ống mẫu	Thay định kỳ hệ thống ống dẫn dây
5	Cắm  ống  mẫu  vào không thấy máy hút mẫu (nhìn bình chứa thải không   có   nước   chảy vào)	Nắp    đậy    bình    chứa dung       dịch       sheath không được đậy kín	Đậy lại nắp bình cho kín
		Van điều tiết bị hỏng	Yêu cầu thay mới
		Bơm nén khí bị hỏng	Yêu cầu thay mới
		Đường  ống  dẫn  trong máy bị tắc	Thay mới
		Cổng hút mẫu bị hỏng (đứt dây dẫn của điện cực	Yêu cầu thay mới cổng hút mẫu.
6	Máy hút mẫu nhưng không thấy tín hiệu trên màn hình	Giá trị của các thông số máy   (Gain,    L-L,    U- L,…) chỉnh chưa đúng	Chỉnh lại các giá trị đó cho đảm bảo
		Ống dẫn mẫu từ cổng hút mẫu đến cuvette bị đứ	Thay đường ống định kỳ để tránh bị trục trặc
		Cuvette  bị  lệch  (sau khi chỉnh các thông số máy không có kết quả)	Căn chỉnh lại vị trí cuvette
		Bộ nguồn laser bị hỏng (mở  máy  không  thấy có tia laser)	Thay mới bộ nguồn laser
		Bộ cảm biến tín hiệu bị hỏng	Thay thế bằng bộ cảm biến mới
		Hỏng hóc các bộ phận điện tử khác	Yêu  cầu  kỹ  sư  của  hãng kiểm tra.
7	Tín hiệu chạy CountCheck không tập trung (không nằm đúng vị trí đã được thiết lập, chân loe rộng)	Nhiệt độ làm việc quá cao	Kiểm tra nhiệt độ làm việc của máy, điều chỉnh về cho đúng
		Bình  nước  sheath  bị nhiễm bẩn	Thay mới dung dịch sheath sau khi đã vệ sinh bình thật kỹ

TT	Hiện tượng	Nguyên nhân	Xử lý
		Trong  đường  ống  có bọt	Thực hiện thao tác ngâm rửa máy để đuổi bọt
		Bình sheath bị hở khí	Kiểm tra, vặn chặt nắp bình
		Cuvette tạo dòng chảy bị rạn vỡ	Thay mới cuvette
8	Tín hiệu chạy CountCheck đạt về hình dạng, vị trí nhưng số lượng hạt đếm được không  phù  hợp  với  số ghi trên nhãn chai	Thao tác lắc lọ chứa CountCheck chưa đúng nên mẫu chưa mang tín đại diện	Cần luyện tay để không bị mắc lỗi này
		Dung dịch countcheck đã bị hỏng (do bảo quản, do sử dụng sai cách kéo dài làm thay đổi nồng độ hạt chuẩn	Thay lọ countcheck mới
		Điện  cực  trong  cổng hút mẫu bị cong nên không đảm bảo thế tích kiểm tra là 200µl	Căn  chỉnh  lại  điện  cực  ở cổng hút mẫu
9	Tín hiệu xuất hiện tốt nhưng không có kết quả đếm CountCheck	Điện  cực  trong  cổng hút  mẫu  bị  bẩn,  dính ướt  nên  dẫn  đến  hiện tượng nối cực	Vệ sinh điện cực, lau khô
10	Khi  cắm  ống   nghiệm vào cổng hút mẫu nhưng máy không tự động bắt đầu hút mẫu	Điện cực của cổng hút mẫu bị bẩn	Vệ  sinh  theo  quy  trình  vệ sinh máy.
		Dây nối của điện cực bị tuột	Kiểm tra lại dây dẫn, đầu nối của các điện cực.
11	Nguồn sáng và vị trí cuvette  đã  được  chỉnh tốt nhưng tín hiệu xuất hiện   vẫn   không  phân tách được tốt  giữa của mẫu và nhiễu nền	Mẫu     phân     tích     bị nhiễm bẩn	Kiểm tra lại máy bằng mẫu khác
		Dung  dịch  sheath  bị bẩn	Thay dung dịch mới
		Miếng   lọc   lắp   trong ống    dẫn    dung    dịch sheath bị tắc do bẩn	Thay  mới  miếng  lọc  trong đường  ống  dẫn  dung  dịch sheath
12	Có  nhiều  tín  hiệu  nhỏ xuất hiện bên trái đồ thị	Bình  chứa  dung  dịch sheath đã bị cạn	Đổ  mới  dung  dịch  sheath vào chai
		Có     bọt    nằm     trong cuvette	Tiến hành rửa máy để đẩy bọt khí ra khỏi cuvette

4. Một số thuật ngữ dùng trong kỹ thuật phân tích tế bào trong dòng chảy

Dot plot: Loại biểu đồ biểu diễn giá trị của 2 thông số. Biểu đồ này có hai trục, mỗi trục sẽ đại diện cho một tín hiệu cần quan tâm. Vị trí mỗi tín hiệu được quyết định bởi cặp giá trị hai tín hiệu của tế bào đó.

Event: Là sự kiện có một hạt – hoặc một tế bào đi ngang qua tia sáng được hệ thống thu nhận tín hiệu phát hiện.

Filter: Bộ lọc tín hiệu quang học, có bản chất là loại kính lọc sáng, cho phép chọn lọc dải bước sóng điện từ đi qua nó. Trong máy phân tích tế bào, nó được sử dụng để tách tín hiệu đặc hiệu và để chuyển hướng tia sáng tín hiệu

FL: Kênh tín hiệu huỳnh quang. Được sử dụng để dại diện cho một cảm biến tín hiệu huỳnh quang (FL1- FL2 – FL3,…) nó chỉ có tính định danh, không có giá trị xác định. Nó hoàn toàn được xác định một cách chủ quan bởi nhà sản xuất.

             FSC: Tín hiệu tán xạ theo hướng tia tới, đặc trưng cho kích thước của tế  bào.

            Gain: Tín hiệu phản xạ của tế bào (hạt) rất nhỏ trong khi độ nhạy của thiết bị nhận biết có giới hạn -> muốn thiết bị nhận biết được tín hiệu thì cần sử dụng bộ phận khuếch đại tín hiệu để khuếch đại nó lên trên mức giới hạn nhận biết của máy.  Gain chính là chỉ số đặc trưng cho mức độ khuếch đại tín hiệu được thiết lập cho thiết bị khuếch đại tín hiệu của máy. Gain càng cao thì càng có nhiều tín hiệu xuất hiện

Gate: là khoảng giới hạn giúp phân biệt quần thể tín hiệu quan tâm khỏi các quần thể tín hiệu khác.

Lin. Là toán tử biểu diễn cường độ tín hiệu tuyến tính, nó ít được sử dụng vì khó biểu diễn phổ tín hiệu có các cụm tín hiệu sai khác nhau nhiều

Log. Là toán tử biểu diễn tín hiệu dạng logarithm, nó được sử dụng vì có khả năng kéo dãn các khoảng giá trị cường độ tín hiệu bị chồng lên nhau đồng thời có khả năng rút ngắn khoảng cách tín hiệu khác nhau.

L-L: Là ngưỡng cắt bỏ các tín hiệu có giá trị nhỏ hơn giá trị quan tâm.

Parameter: Là thông số cần thu thập của mẫu phân tích (do người thao tác quyết định)

Resolution: Độ phân giải tín hiệu, là mức độ chia nhỏ các khoảng tín hiệu được hiển thị trên biểu đồ biểu diễn tín hiệu. Độ phân giải càng cao, các khoảng giá trị được chia càng nhỏ.

Trigger: Là thông số chính, trong kỹ thuật phân tích tế bào trong dòng chảy. Nó cho phép xác định tín hiệu ưu tiên, khi tế bào đi qua điểm phân tích, chỉ có tế bào nào có loại tín hiệu ưu tiên thì sẽ được thu nhận tín hiệu tiếp theo còn những tế bào nào không có tín hiệu ưu tiên thì sẽ không được thu nhận các tín hiệu khác nữa.

SSC: Tín hiệu tán xạ góc bên, đặc trưng cho hình dạng, cấu trúc hạt của tế bào.

            U-L: Là ngưỡng cắt bỏ tín hiệu có cường độ tín hiệu lớn hơn mức tín hiệu quan tâm.